Teknologi pencernaan jaringan enzimatik - dari kolagenase mentah hingga produk pencernaan dengan kemurnian tinggi

Kolagenase, yang biasa digunakan dalam pencernaan jaringan enzimatik, secara khusus mendegradasi kolagen ekstraseluler, memisahkan jaringan kolagen dan fibronektin tanpa merusak integritas struktur permukaan sel. Karena komposisi matriks ekstraseluler yang kompleks, selain kolagen, juga mengandung struktur makromolekul lain seperti elastin dan glikoprotein. Selain itu, jenis jaringan yang berbeda, sumber spesies yang berbeda, dan kelompok umur yang berbeda memiliki komponen matriks ekstraseluler yang berbeda. Oleh karena itu, produk kolagenase komersial umumnya merupakan ekstrak kasar lisat Clostridium lisat, campuran enzim proteolitik seperti kolagenase dan trypsin, yang dapat mendegradasi kolagen dan protein lain, serta zat makromolekul ekstraseluler seperti polisakarida. Aplikasi pencernaan di berbagai jaringan.

Namun, untuk jaringan spesifik yang diisolasi dalam studi eksperimental yang berbeda, perlu untuk memilih produk kolagenase yang sesuai berdasarkan pengalaman, dan mengeksplorasi konsentrasi enzim, volume enzim, dan waktu kerja enzim untuk menemukan skema pencernaan terbaik.

Contoh Pemilihan Produk Roche Collagenase

Produk kolagenase Roche diekstraksi dari Clostridium histolyticum dan diklasifikasikan ke dalam Kolagenase A/B/D/P/H menurut aktivitas enzim yang berbeda dan aplikasi fungsional yang diverifikasi. Ini banyak digunakan dalam pemisahan sel tunggal di berbagai jaringan seperti paru-paru, jantung, otot, tulang, jaringan adiposa, hati, ginjal, tulang rawan, payudara, plasenta, pembuluh darah, jaringan otak dan jaringan tumor. Hasil sel, aktivitas, dan fungsi sel yang diperoleh dari aplikasi tunduk pada kontrol dan verifikasi kualitas produk yang ketat.

Kiat:

Jika jaringan Anda sedang dalam proses pencernaan dan dispersi enzimatik, sel-sel adhesi agar-agar muncul, yang mempengaruhi dispersi sel. Hal ini mungkin disebabkan oleh adhesi DNA yang dilepaskan ke ruang ekstraseluler pada sel yang rusak. Adhesi sel dapat diperoleh dengan penambahan DNase. Dispersi yang lebih baik.

Karena enzim kasar Kolagenase juga mengandung berbagai protease, seperti amilase dan lipase, ia juga mencerna protein pada permukaan sel sehingga menyebabkan kerusakan tertentu pada sel. Selain itu, kolagenase kasar tidak mempertahankan kualitas dan aktivitas enzim yang konsisten di seluruh batch. Bahkan jika Anda menggunakan kumpulan kolagenase yang berbeda untuk pencernaan di jaringan yang sama, Anda tetap perlu mengoptimalkan konsentrasi enzim, volume enzim, dan waktu kerja enzim.

Jadi, bagaimana Anda membuat organisasi Anda mencerna eksperimen tersebut dengan sedikit usaha?

Produk Roche Dispase ^®

Roche Dispase ^® dapat digunakan untuk persiapan sel primer di berbagai jaringan dan organ. Karena sifatnya yang ringan, ia hanya menyebabkan sedikit kerusakan pada sel selama proses pencernaan. Ini juga dapat digunakan untuk subkultur sel dan suspensi sel. Aglomerat dalam cairan dicerna dan didepolimerisasi. Dispase ^® adalah protease netral murni yang diekstraksi dari Bacillus polymyxa untuk menghilangkan kemungkinan kontaminasi mikoplasma dan memiliki stabilitas yang baik pada berbagai kondisi pH dan suhu, sehingga dalam proses pencernaan jaringan. Kinerjanya lebih stabil dibandingkan kolagenase.

Dispase ^® Roche pemisahan khusus pada epidermis dan sel kulit yang dikultur jaringan kortikal diperoleh dalam berbagai aplikasi. Perbedaan Dispase ^® I dan Dispase ^® II terletak pada perbedaan kemurniannya. Dispase ^® I disterilkan dengan filter dan kemurnian serta aktivitas enzim per mg Dispase ^® I jauh lebih tinggi dibandingkan Dispase ^® II.

Campuran Enzim Tingkat Penelitian Kemurnian Tinggi Roche Campuran Enzim Tingkat Penelitian Liberase

Campuran Enzim Tingkat Penelitian Liberase mengandung serangkaian campuran enzim yang terdiri dari campuran rasio protease netral (non-clostridium protease) yang berbeda dan Kolagenase I + Kolagenase II dengan kemurnian tinggi. Dalam sebagian besar aplikasi, Liberase menggantikan kolagenase tradisional dan meningkatkan hasil sel, kelangsungan hidup sel, dan fungsi sel.

Di bawah kondisi fermentasi dan pemurnian enzim yang ketat, Campuran Enzim Kelas Penelitian Liberase menghilangkan enzim seperti Clostridin dan trypsin, menghilangkan >98% endotoksin dan komponen sel mati lainnya dari bahan mentah, sehingga berkontribusi pada organisasi. Selama proses pencernaan, kelangsungan hidup sel sangat meningkat. Seri Liberase disterilkan dengan filter dan memiliki konsistensi batch-ke-batch yang tinggi, memastikan kualitas pencernaan dan pengulangan selama fase percobaan.

Perbandingan penggantian produk seri Roche kolagenase dan Liberase

Kiat:

1. Produk seri Liberase dibagi menjadi lima jenis produk dengan aktivitas pencernaan berbeda sesuai dengan rasio kolagenase dan protease netral yang berbeda. Anda dapat merujuk pada penelitian laboratorium lain atau literatur yang diterbitkan untuk pemilihan produk yang sesuai dan referensi prosedur operasional.

Https://?id=col_030100

2. Untuk upaya pencernaan sel jaringan baru, disarankan untuk memulai percobaan Anda dengan LiberaseTM, yang memiliki fleksibilitas yang baik untuk berbagai jaringan.

3. Kemurnian Kolagenase I + II dalam Liberase sangat tinggi, dan waktu inkubasi biasanya berkurang 10 – 30% dibandingkan dengan percobaan pencernaan kolagenase konvensional.

Harap dicatat: Produk Liberase Research Grade dan produk enzim pencernaan lainnya hanya untuk penelitian ilmu hayat dan penelitian in vitro. Jangan gunakan produk ini untuk prosedur klinis dan diagnostik (misalnya transplantasi pulau kecil manusia).

Untuk informasi lebih lanjut tentang produk Liberase, silakan klik untuk mengunduh manualnya.