Petunjuk Enzyme Linked Immunoassay (ELISA) Tikus Kolagenase II (Collagenase II)

Perusahaan kami adalah pemasok kit ELISA. Harganya adil. Layanan pra-penjualan, penjualan, dan purna jual siap melayani Anda. Berikan layanan tes gratis, silakan hubungi kami!

Tikus Kolagenase II (ELISA)

Buku petunjuk kit

Reagen ini hanya untuk keperluan penelitian

Tujuan: Kit ini digunakan untuk mengetahui kandungan Kolagenase II dalam serum tikus, plasma dan sampel cairan terkait.

Prinsip eksperimental:

Kit ini menggunakan metode sandwich antibodi ganda untuk menentukan tingkat Kolagenase II dalam spesimen. Pelat mikropori dilapisi dengan antibodi Kolagenase II tikus yang dimurnikan untuk membuat antibodi fase padat. Kolagenase II ditambahkan ke microwell berlapis antibodi monoklonal secara bergantian, diikuti oleh ikatan antibodi kolagenase II (Collagenase II) berlabel HRP untuk membentuk kompleks antibodi berlabel antibodi-antigen-enzim. Setelah pencucian menyeluruh, media TMB ditambahkan untuk pengembangan warna. TMB diubah menjadi biru di bawah katalisis enzim HRP, dan menjadi kuning akhir di bawah aksi asam. Kedalaman warna berkorelasi positif dengan Kolagenase II dalam sampel. Absorbansi (nilai OD) diukur dengan microplate reader pada panjang gelombang 450 nm, dan konsentrasi kolagenase II tikus (Collagenase II) dalam sampel dihitung dengan kurva standar.

Pemrosesan sampel dan persyaratan:

1. Serum: darah suhu ruangan menggumpal secara alami selama 10-20 menit, disentrifugasi selama kurang lebih 20 menit (2000-3000 rpm). Kumpulkan supernatan dengan hati-hati dan sentrifugasi kembali jika muncul endapan selama penyimpanan.

2. Urine : ditampung dalam tabung steril dan disentrifugasi selama kurang lebih 20 menit (2000-3000 rpm). Kumpulkan supernatan dengan hati-hati. Jika terbentuk endapan selama penyimpanan, sentrifugasi kembali. Pleura dan asites, implementasi referensi cairan serebrospinal.

3. Plasma: EDTA atau natrium sitrat harus dipilih sebagai antikoagulan sesuai dengan persyaratan spesimen. Setelah pencampuran selama 10-20 menit, centrifuge selama kurang lebih 20 menit (2000-3000 rpm). Kumpulkan supernatan dengan hati-hati. Jika terbentuk endapan selama penyimpanan, maka harus disentrifugasi kembali.

4. Supernatan kultur sel: Jika komponen yang disekresi terdeteksi, kumpulkan dengan tabung steril. Centrifuge selama kurang lebih 20 menit (2000-3000 rpm). Kumpulkan supernatan dengan hati-hati. Jika komponen di dalam sel terdeteksi, encerkan suspensi sel dengan PBS (PH7.2-7.4), dan konsentrasi sel akan mencapai sekitar 1 juta/ml. Melalui pembekuan dan pencairan berulang kali, sel-sel dihancurkan dan komponen intraseluler dilepaskan. Centrifuge selama kurang lebih 20 menit (2000-3000 rpm). Kumpulkan supernatan dengan hati-hati. Jika terbentuk endapan selama penyimpanan, maka harus disentrifugasi kembali.

5. Susunlah benda uji: setelah benda uji dipotong, timbanglah. Tambahkan PBS dalam jumlah tertentu, PH7.4. Bekukan dengan cepat dan simpan dengan nitrogen cair untuk digunakan nanti. Setelah benda uji meleleh, suhunya masih tetap 2-8°C. Tambahkan PBS (PH7.4) dalam jumlah tertentu dan homogenkan benda uji dengan manual atau homogenizer. Centrifuge selama kurang lebih 20 menit (2000-3000 rpm). Kumpulkan supernatan dengan hati-hati. Setelah aliquoting, sebagian akan diuji, dan sisanya dibekukan untuk digunakan di masa mendatang.

6. Spesimen harus diambil sesegera mungkin setelah pengumpulan. Ekstraksi harus dilakukan sesuai dengan literatur yang relevan. Percobaan harus dilakukan sesegera mungkin setelah ekstraksi. Jika pengujian tidak dapat dilakukan segera, spesimen dapat disimpan pada suhu -20 ℃, tetapi pembekuan dan pencairan berulang kali harus dihindari.

7. Sampel yang mengandung NaN3 tidak dapat terdeteksi karena NaN3 menghambat aktivitas horseradish peroxidase (HRP).

Tindakan pencegahan:

1. Kristal dapat diendapkan dalam cairan pencuci pekat, yang dapat dipanaskan dan dilarutkan dalam penangas air selama pengenceran, dan hasilnya tidak akan terpengaruh selama pencucian.

2. Film penyegel dibatasi untuk penggunaan satu kali saja untuk menghindari kontaminasi silang.

3. Sampler harus digunakan pada setiap langkah penambahan sampel, dan keakuratannya harus diperiksa secara berkala untuk menghindari kesalahan pengujian. Yang terbaik adalah mengontrol waktu pengambilan sampel dalam 5 menit. Jika spesimennya banyak, disarankan menggunakan voli gun untuk menambahkan sampel.

4. Kit harus diseimbangkan pada suhu kamar selama 15-30 menit sebelum dikeluarkan dari lingkungan berpendingin. Jika pelat berlapis label enzim belum dibuka, strip harus disimpan dalam kantong tertutup.

5. Harap buat kurva standar pada saat yang sama untuk setiap pengukuran, yang terbaik adalah membuat lubang ganda. Jika kandungan zat uji dalam benda uji terlalu tinggi (nilai OD sampel lebih besar dari nilai OD sumur pertama sumur standar), harap encerkan terlebih dahulu dengan kelipatan tertentu (n kali) pengencer sampel, lalu tentukan. Saat menghitung, kalikan total pengenceran dengan Kelipatan (× n × 5).

6. Harap jauhkan media dari cahaya.

7. Ikuti instruksi dengan ketat, dan hasil tes harus ditentukan oleh pembaca pelat mikro.

8. Semua sampel, cairan pencuci dan berbagai limbah harus diperlakukan sebagai agen penular.

9. Komponen dari batch yang berbeda dari reagen ini tidak boleh dicampur.

10. Jika ada perbedaan dengan manual bahasa Inggris, manual bahasa Inggris yang akan berlaku.

Komposisi paket:

Komposisi perlengkapan

Konfigurasi 48 lubang

Konfigurasi 96 sumur

menyimpan

instruksi

1 porsi

1 porsi

Film penyegel

2 buah (48)

2 buah (96)

tas tertutup

1

1

Pelat berlapis enzim

1 × 48

1 × 96

Simpan pada suhu 2-8 ℃

Produk standar: 2700ng/L

0,5ml × 1 botol

0,5ml × 1 botol

Simpan pada suhu 2-8 ℃

Pengenceran standar

1,5ml × 1 botol

1,5ml × 1 botol

Simpan pada suhu 2-8 ℃

Reagen enzim

3 ml × 1 botol

6 ml × 1 botol

Simpan pada suhu 2-8 ℃

Contoh pengencer

3 ml × 1 botol

6 ml × 1 botol

Simpan pada suhu 2-8 ℃

Pengembang Cairan

3 ml × 1 botol

6 ml × 1 botol

Simpan pada suhu 2-8 ℃

Cairan pengembang B

3 ml × 1 botol

6 ml × 1 botol

Simpan pada suhu 2-8 ℃

Hentikan solusi

3ml × 1 botol

6ml × 1 botol

Simpan pada suhu 2-8 ℃

Cairan pencuci pekat

(20ml × 20 kali) × 1 botol

(20ml × 30 kali) × 1 botol

Simpan pada suhu 2-8 ℃

Tangga

1. Tambahkan sampel: siapkan sumur kosong secara terpisah (sumur kontrol kosong tidak menambahkan sampel dan reagen berlabel enzim, langkah selanjutnya sama) dan sumur sampel yang akan diuji. Tambahkan 40μl pengencer sampel ke dalam sumur sampel uji pada pelat berlapis enzim, lalu tambahkan 10μl sampel yang akan diuji (pengenceran akhir sampel adalah 5 kali). Tambahkan sampel dan tambahkan sampel ke dasar sumur pelat mikro, usahakan jangan menyentuh dinding sumur, kocok perlahan agar tercampur.

2. Pengenceran dan pemuatan produk standar: letakkan 10 sumur standar pada pelat berlapis enzim, tambahkan 100 μl produk standar pada sumur pertama dan kedua, lalu tambahkan produk standar pada sumur pertama dan kedua 50 μl pengencer, aduk rata; kemudian ambil 100μl dari sumur pertama dan sumur kedua dan tambahkan masing-masing ke sumur ketiga dan keempat, lalu tambahkan 50μl pengencer standar ke sumur ketiga dan keempat, aduk rata; Kemudian ambil masing-masing 50μl di sumur ketiga dan keempat dan buang, lalu tambahkan masing-masing 50μl ke sumur kelima dan keenam, lalu tambahkan 50ul larutan pengencer standar masing-masing ke sumur kelima dan keenam, dan aduk rata; Setelah tercampur, ambil 50μl dari sumur kelima dan keenam dan tambahkan masing-masing ke sumur ketujuh dan kedelapan. Kemudian tambahkan 50μl larutan pengenceran standar ke sumur ketujuh dan kedelapan. Ambil 50μl dari delapan sumur dan tambahkan ke sumur kesembilan dan kesepuluh. Kemudian tambahkan 50μl larutan pengenceran standar ke sumur kesembilan dan kesepuluh. Setelah tercampur, ambil 50μl dari sumur kesembilan dan kesepuluh dan buang. (Setelah pengenceran, volume masing-masing sumur adalah 50μl, dan konsentrasinya adalah 1800ng/L, 1200ng/L, 600ng/L, 300ng/L, 150ng/L)

3. Inkubasi: Tutup piring dengan pelat penyegel dan inkubasi pada suhu 37°C selama 30 menit.

4. Larutan pencampur: Encerkan 30 kali (20 kali 48T) cairan pencuci pekat dengan air suling 30 kali (20 kali 48T) lalu gunakan.

5. Pencucian: Lepaskan lapisan penutup dengan hati-hati, buang cairannya, keringkan, isi setiap lubang dengan cairan pencuci, diamkan selama 30 detik lalu buang, ulangi 5 kali dan keringkan.

6. Inkubasi: Pengoperasiannya sama seperti 3.

7. Mencuci: Pengoperasiannya sama seperti 5.

8. Pengembangan warna: Tambahkan 50μl pengembang A ke setiap sumur, lalu tambahkan 50μl pengembang B, aduk perlahan, dan kembangkan pada suhu 37 ° C dalam gelap selama 15 menit.

9. Tambahkan enzim: tambahkan 50μl reagen label enzim ke setiap sumur, kecuali sumur kosong.

10. Penghentian: Tambahkan 50μl larutan penghenti ke setiap sumur untuk menghentikan reaksi (saat ini warna biru akan berubah menjadi kuning).

11. Penentuan : Ukur absorbansi (nilai OD) masing-masing sumur secara berurutan dengan blanko AC pada panjang gelombang nol dan 450 nm. Pengukuran harus dilakukan dalam waktu 15 menit setelah menambahkan larutan penghenti.

Kondisi penyimpanan dan masa berlaku:

1. Simpan kit: 2-8 ℃.

2. Validitas: 6 bulan

Kinerja perangkat:

1. Koefisien korelasi R antara regresi linier sampel dan konsentrasi yang diharapkan berada di atas 0,95.

2. Batch dan persetujuan masing-masing harus kurang dari 9% dan 11%.

rentang pemeriksaan:

100ng/L -2000ng/L

Perhitungan:

Dengan mengambil konsentrasi standar sebagai absis dan nilai OD sebagai ordinat, gambarlah kurva standar pada kertas koordinat, dan temukan konsentrasi yang sesuai dari kurva standar sesuai dengan nilai OD sampel; lalu kalikan dengan faktor pengenceran; Hitung persamaan regresi linier kurva standar dengan nilai OD, substitusikan nilai OD sampel ke dalam persamaan, hitung konsentrasi sampel, dan kalikan dengan faktor pengenceran untuk mendapatkan konsentrasi sampel sebenarnya.