Kit Deteksi Kuantitatif Kolagenase I (Kolagenase I) Tikus (ELISA)

Kit Deteksi Kuantitatif Kolagenase I (Kolagenase I) Tikus (ELISA)

panduan pengguna

【Nama perangkat】

Kit Deteksi Kuantitatif Kolagenase I (Kolagenase I) Tikus (ELISA)

【Penggunaan kit】

Deteksi kuantitatif kolagenase I (Collagenase I) dalam serum tikus, plasma, dan sampel cairan terkait.

【Prinsip deteksi】

Kit ini menggunakan uji imunosorben terkait enzim sandwich satu langkah (ELISA) antibodi ganda. Standar, sampel uji dan larutan kerja berlabel enzim ditambahkan ke pelat transparan berlabel enzim yang dilapisi dengan antibodi tikus kolagenase I (Kolagenase I), dan setelah inkubasi selama waktu yang cukup, komponen yang tidak terikat dicuci bersih. Tambahkan pengembang A dan B secara bergantian, pengembang (TMB) diubah menjadi produk biru yang dikatalisis oleh horseradish peroxidase (HRP), dan berubah menjadi kuning di bawah aksi asam. Konsentrasi Kolagenase I (Kolagenase I) berkorelasi positif. Nilai OD diukur pada panjang gelombang 450 nm. Berdasarkan nilai OD standar dan sampel, dihitung kandungan kolagenase I tikus (Collagenase I) dalam sampel.

【Komposisi perlengkapan】

1

Pelat berlapis enzim

12 lubang × 4 strip

7

Pengembang Cairan

3mL

2

Produk standar: 96ng / mL

0,6mL

8

Cairan pengembang B

3mL

3

20 kali cairan pencuci pekat

15mL

9

Hentikan solusi

3mL

4

Pengenceran standar

3mL

10

instruksi

1 porsi

5

Contoh pengencer

3mL

11

Film penyegel

2 lembar

6

Reagen enzim

5mL

12

tas tertutup

1

Keterangan: Produk standar diencerkan dengan pengencer produk standar dengan urutan: 96, 48, 24, 12, 6, 3 ng/mL

[Reagen dan peralatan diperlukan tetapi tidak disediakan]

1. termostat 37 ℃

2. Pembaca pelat mikro spesifikasi standar

3. Pipet presisi dan ujung sekali pakai

4. Air sulingan

5. Tabung reaksi sekali pakai

6. Kertas penyerap

【Tangga】

1. Persiapan: Keluarkan kit reagen dari lemari es dan seimbangkan kembali pada suhu kamar selama 30 menit.

2. Larutan pencampur: encerkan larutan pencuci pekat 20 kali lipat dengan air suling ke larutan aslinya.

3. Tambahkan produk dan sampel standar yang akan diuji: ambil pelat berlapis enzim secukupnya dan pasang pada bingkai. Menyiapkan sumur standar, sumur sampel yang akan diuji dan mengosongkan sumur kendali, mencatat posisi masing-masing sumur pada sumur standar. Tambahkan 50μL standar; tambahkan 10μL sampel yang akan diuji ke dalam sumur sampel, lalu tambahkan 40μL pengencer sampel (yaitu, sampel diencerkan 5 kali); tambahkan 100μL larutan kerja berlabel enzim ke setiap sumur; tidak ada kontrol kosong dengan baik.

4. Inkubasi: Inkubasi dalam penangas air bersuhu 37°C atau termostat selama 60 menit.

5. Cuci piring: buang cairannya, keringkan di atas kertas penyerap, isi setiap lubang dengan cairan pencuci, diamkan selama 1 menit, kibaskan cairan pencuci, keringkan di atas kertas penyerap, ulangi pencucian 5 kali dengan cara ini (Petunjuk mencuci papan).

6. Pengembangan warna: tambahkan 50 μL larutan pengembang A ke setiap sumur, kemudian tambahkan 50 μL larutan pengembang B, dan kembangkan warna pada suhu 37 ° C dalam gelap selama 15 menit.

7. Penghentian: Lepaskan pelat label enzim dan tambahkan 50μL larutan penghenti ke setiap sumur untuk menghentikan reaksi (warna berubah dari biru menjadi kuning).

8. Penentuan: Nolkan lubang kosong, dan dalam waktu 15 menit setelah penghentian, ukur serapan (nilai OD) masing-masing sumur dengan panjang gelombang 450 nm.

9. Perhitungan: Berdasarkan konsentrasi produk standar dan nilai OD yang sesuai, hitung persamaan regresi linier dari kurva standar, lalu hitung konsentrasi sampel yang sesuai pada persamaan regresi sesuai dengan nilai OD sampel. Anda juga dapat menggunakan berbagai perangkat lunak aplikasi untuk Perhitungan. Konsentrasi akhir adalah konsentrasi aktual yang diukur dikalikan faktor pengenceran.

[Persyaratan sampel]

1. Sampel tidak boleh mengandung natrium azida (NaN3) karena natrium azida (NaN3) merupakan penghambat horseradish peroxidase (HRP).

2. Spesimen harus diambil sesegera mungkin setelah pengumpulan. Ekstraksi harus dilakukan sesuai dengan literatur yang relevan. Percobaan harus dilakukan sesegera mungkin setelah ekstraksi. Jika pengujian tidak dapat dilakukan segera, spesimen dapat disimpan pada suhu -20 ℃, tetapi pembekuan dan pencairan berulang kali harus dihindari.

3. Sampel harus disentrifugasi sepenuhnya, tanpa hemolisis dan partikel.

【Tindakan pencegahan】

1. Percobaan dilakukan sesuai dengan instruksi, dan hasil percobaan harus ditentukan oleh pembacaan pembaca lempeng mikro.

2. Jika papan berlapis berlabel enzim tidak habis setelah dibuka, papan tersebut harus dimasukkan ke dalam kantong tertutup dan segera ditambahkan pengering.

3. Direkomendasikan agar semua standar, sampel, dan kontrol kosong diuji dalam rangkap dua, dan nilai rata-rata diambil untuk mengurangi kesalahan eksperimen.

4. Jika warnanya terlalu terang, waktu inkubasi media dapat diperpanjang dengan baik.

5. Untuk menghindari kontaminasi silang, standar, sampel dan blanko kontrol harus diganti dengan tip untuk setiap tambahan; komponen umum seperti larutan kerja enzim, pengencer sampel dan substrat harus ditambahkan dengan kantilever, dan tidak boleh menyentuh microwell; Jangan menggunakan kembali film penyegel.

6. Kit digunakan dalam masa garansi, dan kumpulan reagen yang berbeda tidak boleh dicampur.

7. Substrat B sensitif terhadap cahaya dan menghindari paparan cahaya dalam waktu lama.

[Ringkasan prosedur operasi]

Siapkan reagen, sampel dan standar

Tambahkan sampel yang telah disiapkan, standar dan larutan kerja standar enzim, dan bereaksi pada 37 ℃ selama 60 menit

Cuci piring 5 kali, tambahkan larutan pengembangan warna A dan B, dan kembangkan pada suhu 37 ℃ selama 15 menit

Tambahkan solusi penghentian

Baca nilai OD dalam waktu 15 menit

Perhitungan

【rentang ujian】

3-96ng/mL

【spesifikasi】

48 porsi/kotak

【Penyimpanan】

Simpan pada suhu 2-8 ℃, terlindung dari cahaya dan kelembapan.

【Keabsahan】

6 bulan